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技術文章

細胞又雙叒叕污染了，莫慌，幫您拯救珍貴細胞！

更新更新時間：2021-04-29 瀏覽次數：3899

在細胞培養過程中，廣大科研工作者一直飽受微生物污染的困擾，幾乎所有科研單位的細胞房都曾經遭受過細菌、真菌、支原體、黑膠蟲的污染，尤其是一些珍貴的細胞種子，一旦招惹上這幾個家伙，甚至面臨“絕種”的危險。針對細胞培養當中面臨的普遍的問題，作為科研工作者的我們必須清楚認識這些微生物，并通過技術手段判斷細胞遭受了哪種污染，準確的對癥下藥，才能為我們的細胞保駕護航。

1 細菌污染

1.1 細菌污染的鑒別

細菌污染是細胞培養當中最常出現的污染類型，槍頭不小心碰到瓶壁、手不小心從培養瓶口處穿過、培養基倒入培養瓶等等，不經意的一個小動作，都可能會造成細菌污染，以致于實驗前功盡棄。細菌污染在沒有爆發或培養體系中含有雙抗時，細菌污染較容易被科研工作者忽視，黑點在顯微鏡下一穿而過，小黑點因為數量少且移動迅速而不易發現。隨著細菌在培養體系中的增多或者體系中撤掉雙抗以后，細菌可以從鏡下明顯識別，會呈現黑色條狀、棒狀、球狀，培養基的外觀也會發生明顯的變化，培養基變渾濁，有細沙狀沉淀，有時會伴有臭味。

1.2 細菌污染的解決方式

一般的細胞培養體系中，普遍采用雙抗或者三抗進行細菌的預防，但這兩者存在一定的局限性，比如只能預防，而不能拯救已經細菌污染的細胞。另外，很多科研工作者從事原代的細胞分離和培養工作，在從動物身上取材并分離培養的過程中，極易造成細菌污染，如果只是加入雙抗或三抗進行沖洗組織，細菌污染無法避免，造成了珍貴動物組織的浪費。

好物推薦-鏡像綺點（iCell）細胞污染高效清除劑

iCell 細胞污染高效清除劑，不僅兼具雙抗或三抗預防細菌的功效，還可以清除支原體污染，有效消除真菌和細菌的污染，只需 1-3 天就可顯著抑制支原體、真菌、細菌的增殖，本產品經過了上百種細胞的測試和長期的實驗驗證，兼具高效和廣譜清除細胞污染物的能力，對細胞生長幾乎無影響，大程度上挽救您的細胞。
2.真菌污染

2.1 真菌污染的鑒別

實驗室污染的真菌一般為三類：念珠菌、酵母菌、霉菌，細胞污染真菌通常不易察覺，只有霉菌會逐漸出現細絲團狀漂浮物，較容易從外觀發覺污染，其他真菌污染不像細菌污染培養基會渾濁，污染后培養液清澈透亮，與未污染的細胞從外觀上看無明顯變化。
在顯微鏡下比較容易判斷污染類型，念珠菌呈卵圓狀，在細胞周邊生長，酵母菌出芽生殖時有明顯的一大一小連體結構，霉菌可觀察到菌體，菌絲呈絲狀、管狀、樹枝狀。

2.2 真菌污染的解決方式

真菌污染由于不容易通過培養基的變化來判斷，一般發現時就是已經爆發了，鏡下會出現明顯團狀或黑色絲狀污染物，細胞狀態明顯變差，很難救活。傳統的預防真菌污染的方式為培養體系中加入三抗，但是一旦發生真菌污染，三抗對于明顯的真菌污染就顯得心有余而力不足，此時建議如果是還留存種子的細胞就立刻扔掉，*消毒滅菌細胞房和 CO2 培養箱，扔掉可能被污染的培養基，對用過的實驗器材進行滅菌。

好物推薦-鏡像綺點（iCell）真菌清除劑

真菌清除劑用于防止細胞培養過程中的真菌（包括酵母）污染，還可用于消除細胞培養物中的真菌（含酵母）污染。療效遠超真菌抗生素兩性霉素 B，對細胞培養過程中的真菌污染，如白色念珠菌、曲霉、酵母有很好的療效。

真菌清除試劑經過了上百種細胞的測試和長期的實驗驗證，只需 1-3 天就可以抑制真菌增長。對細胞基本無害，具有高效、特異性殺滅的特點，大程度上挽救珍貴的細胞，減少真菌污染帶來的損失。

3 黑膠蟲污染

3.1 黑膠蟲污染的鑒別

“黑膠蟲”是一種常見的細胞污染物，與細胞共生，隨細胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細胞競爭性生長，對細胞生長不利，嚴重時導致細胞死亡。目前很多細胞存在被“黑膠蟲”污染的現象，對細胞培養及其后續實驗造成了極大地影響。
“黑膠蟲”污染的細胞常見的特性有以下幾點：
（1）培養基不渾濁，但在顯微鏡下觀察細胞時，細胞周圍和培養液中有很多“小黑點”，且隨著培養時間的延長“小黑點”逐漸增多，更換培養液或洗滌細胞不能將其去除；
（2）“黑膠蟲”污染的細胞，營養消耗快，需要頻繁更換培養液；
（3）“黑膠蟲”污染的細胞生長緩慢，細胞狀態差，空泡化嚴重，甚至還可能導致細胞形態的改變。

3.2 黑膠蟲污染的解決方式
對于黑膠蟲污染的細胞，最為快速有效的處理方式就是采用黑膠蟲清除劑對黑膠蟲進行清除，同時確保培養體系中的血清必須為無黑膠蟲和原蟲污染的優質血清。

好物推薦-鏡像綺點（iCell）黑膠蟲清除劑

黑膠蟲清除試劑用于清除細胞培養過程中產生的“黑點”，只需 1-3 天就可以顯著抑制“黑點”生長，一周左右即可清除“黑點”。

本產品經過了上百種細胞的測試和長期的實驗驗證，對細胞生長無明顯影響，具有高效、特異性殺滅的特點，可顯著清除黑膠蟲污染，大程度上挽救珍貴的細胞。

黑膠蟲清除案例

4 支原體污染

4.1 支原體污染的鑒別

支原體直徑約為 0.1-0.3 μm，具有變形能力，可透過常見過濾膜（0.22-0.45 μm），因此常規的無菌過濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對支原體無效。
支原體污染是細胞培養領域的一個世界性問題，世界各國細胞系支原體污染的平均比例為 30-60%。支原體可通過細胞之間交叉污染，操作人員的口腔、皮膚造成污染，或者血清等添加物而帶入污染。

支原體在光學顯微鏡下不可見，一般不會引起培養物混濁，因此細胞被支原體污染一般難以察覺。
支原體會消耗必須氨基酸，影響細胞生長速率，促進代謝物積累，改變細胞形態，影響 DNA、RNA 以及蛋白質的合成，抑制細胞因子表達，改變被污染細胞的基因表達譜，誘導染色體畸變。

好物推薦-鏡像綺點（iCell）支原體 PCR 檢測試劑盒
支原體 PCR 檢測試劑盒是優選直擴式 PCR 酶擴增支原體基因組中保守 16SrDNA 而設計的，不會擴增細菌等其他基因組，兼具特異性和高靈敏性的特點，且本試劑盒檢測范圍廣，可檢測：(1)M.Hyorhinis，(2)M.Fermentans，(3)M.Arginini，(4)M. hominis，(5)M. orale，(6)M. salivarium，(7)M.pirum，(8)Acholeplasma Laidlawii，(9)M. agalactiae， (10)M.bovis，(11)M. buccale，(12)M. arthritidis，(13)M. pulmonis 等幾乎所有常見的污染細胞的支原體(注：M.為 Mycoplasma 的縮寫)。
以上 13 種支原體約占細胞支原體污染的 99% 以上。絕大多數支原體污染集中于前 8 種。因此非常適合于與細胞生物學相關的科研實驗室及企業的日常支原體檢測。

●高廣譜性，可檢測所有可能含有支原體的樣品

●高靈敏度，可檢測低至 10 copies 的支原體

●高特異性，真核生物、細菌的基因組不會被檢測

●高保真性，本試劑盒含有陽標和陰標，可有效避免 PCR 反應假陰性和假陽性

●操作簡易，本試劑盒的預混體系包含 PCR 反應所需試劑

●耗時短，本試劑盒能夠在 2 小時內完成支原體檢測

4.2 支原體污染的解決方式

好物推薦-鏡像綺點（iCell）支原體預防劑

支原體預防試劑適合細胞支原體感染的預防，不僅可用于預防環境和體系可能造成的支原體交叉污染，還可應用于防止支原體污染的復發。

本產品經過了上百種細胞的測試和長期的實驗驗證，只需 1-3 天就可以顯著抑制支原體生長，對細胞生長幾乎無影響，兼具高效與溫和清除細胞污染物的特點，大程度上挽救您的細胞。

好物推薦-鏡像綺點（iCell）支原體清除劑（三款）：
支原體高效清除劑、支原體清除劑、支原體清除劑 plus

支原體清除劑適合支原體污染嚴重的細胞，不僅可用于細胞株，還可應用于“脆弱”和易變形的細胞，如各類原代細胞、干細胞、上皮樣細胞系，不僅可以顯著清除支原體污染，還具有消除細菌污染的能力。

支原體清除劑有三種，分別是支原體清除劑、支原體高效清除劑、支原體清除劑 plus。
支原體溫和清除劑：溫和、高效清除支原體，對細胞生長幾乎無影響，覆蓋所有細胞類型。

支原體清除劑：適合支原體污染非常嚴重，產生較強耐藥性的細胞支原體清除。

支原體清除劑 plus：適用于支原體污染非常嚴重、有*耐藥性且污染多種支原體的情況，此情況較為少見。

本產品經過了上百種細胞的測試和長期的實驗驗證，只需 1-3 天就可以顯著抑制支原體生長， 2 周左右即可清除支原體污染，兼具快速和高效清除細胞污染物的特點，大程度上挽救您的細胞。

好物推薦-鏡像綺點（iCell）支原體清除服務

① 根據客戶提供的細胞名稱、細胞代次、細胞類型制定細胞的支原體清除方案；

② 細胞 STR 鑒定；

③ 支原體 PCR 高敏法檢測支原體污染程度；

④ 細胞的支原體清除。一般污染單一支原體的清除時間為 2 周左右，感染多種支原體且非常嚴重的細胞，清除時間需要延長，約 3-4 周左右；

⑤ 2 周后，再次進行支原體檢測，如果細胞支原體清除干凈，將換為 iCell 預防支原體方案，繼續一周左右時間；如未清除干凈，適當延長 1-2 周清除頑固支原體，1-2 周后再次進行復檢。

支原體清除案例

如上圖 1 所示，左側為支原體污染的 MCF-7（100X）細胞，右側為支原體清除后的 MCF-7 細胞，倒置顯微鏡下可明顯看出細胞間隙間黑點明顯減少，細胞邊緣清晰，狀態良好。

如上圖 2 所示，左側為支原體污染的 Hep G2 （200X）細胞，右側為支原體清除試劑處理的Hep G2 細胞。左側有支原體污染的細胞樣品可以觀察到細胞核周圍微粒狀或絲狀藍色熒光。
支原體污染嚴重的細胞可以觀察到大量微粒狀或絲狀藍色熒光。右側細胞支原體污染被清除干凈，僅觀察到細胞核的藍色熒光，證明支原體已被清除干凈。

好物推薦-鏡像綺點（iCell）實驗室除菌衛士

實驗室衛士為高效廣譜除菌劑，具有廣譜殺菌性，能有效阻止真菌（和孢子），細菌（和孢子），支原體和病毒（包括 HIV 和 Hepatitis B）的生長和污染，去除效率能夠達到99.999 %，不含汞、甲醛、ben酚或酒精等刺激性物質，無毒、無刺激性氣味、可生物降解、不染色衣服、可消除氣味。
對一般的工作臺和器材表面（包括不銹鋼材質）沒有任何損傷，不損傷漆面光澤，不會使塑料老化，培養箱、超凈工作臺、生物安全柜、細胞培養和分子生物學實驗室均可使用。

實驗室衛士的殺菌范圍依賴噴灑時間，15 秒內可滅活：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、變形桿菌、沙門氏菌、假絲酵母菌；
30 秒內可滅活：青霉菌、曲霉菌；
60 秒內可滅活：綠膿桿菌；
30 分鐘內可滅活：支原體、衣原體、金黃色葡萄球菌、埃希氏菌、假單胞菌、克雷伯氏菌、假絲酵母菌；30 分鐘可破壞：曲霉菌（包括黑曲霉）、艾滋病毒，乙型肝炎病毒。

本品為即用型噴霧，直接使用即可。

好物推薦-鏡像綺點（iCell）水浴鍋除菌劑

水浴鍋除菌劑是針對水浴環境的高效抗菌劑，能夠有效殺滅細菌、真菌、支原體，保持細胞水浴的無菌狀態。
水浴鍋、水浴搖床是細胞污染源之一，使用本產品能夠有效清除和抑制革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、支原體等易在水中滋生的微生物生長，有效防止細胞污染。

好物推薦-鏡像綺點（iCell）細胞培養箱水盤除菌劑

CO2 培養箱在細胞培養中普遍使用，由于半敞開式的培養瓶中培養基的滲漏，高濕度及適宜溫度為培養箱中微生物滋生提供條件，所以要提前預防，避免污染源出現。
細胞培養箱水盤除菌劑是 CO2 培養箱水盤的消毒劑，可有效殺滅支原體、細菌、酵母菌和真菌，建議每 2 周或至少 1 個月，進行一次系統地清潔和消毒培養箱，可去除培養過程中的潛在污染源。

細胞污染不易察覺，卻是關乎我們實驗成敗的大事，越是需要我們日常的認真對待，相信以上對于細胞房常見污染物的鑒別和解決方案的制定，能幫助我們科研工作者解決細胞最重要的問題，如果您還是未找到問題所在，歡迎您登錄鏡像綺點網站，關注鏡像綺點，我們期待著為您解答。

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